当病原微生物侵入时，天然免疫系统是人体 的第一道防线，吞噬细胞及补体是天然免疫系统 的重要组成部分。吞噬细胞通过呼吸爆发反应产 生过氧阴离子非特异杀灭入侵的微生物。CGD的 发病机制源于吞噬细胞呼吸爆发缺陷。患者主要 表现为反复细菌、真菌感染和炎性肉芽肿 ^[3] 。虽然 该病是少见病，但我国人口基数大，病人总数是 可观的。随着认识的深入，近年国内报道的病例 数逐渐增多，我院每年病例数至少十余例 ^{[4, 5]} ，因 此尽快明确诊断，及时有效的治疗，系统的预防 治疗对此类患儿尤其重要。

评价呼吸爆发的实验方法有很多，如光泽精 (lucigenin)或鲁米诺(luminol)依赖的化学发 光，细胞色素C还原实验或四氮唑蓝(p-Nitro-Blue tetrazolium chloride,NBT)还原实验 ^[6] 。NBT还原 实验是最先应用的CGD的筛查方法 ^[7] 。NBT是淡 黄色染料，被过氧化物还原为深蓝色的不溶于水的代谢产物。CGD患者的中性粒细胞在NBT和适 当刺激孵育下，不能形成细胞内深蓝色的沉积物， 借以与正常中性粒细胞区别。NBT实验是CGD筛 查的准确方法，但主观性强，而且是基于有限数 量细胞的显微镜观察。大部分CGD患者用该方法 检测不到活性，但一些病例可产生少量过氧化物 (X ⁺ -CGD)，无呼吸爆发，稳定的活性可持续1 h 或更久。由于NBT依赖于蓝黑色沉淀物的聚集， 随时间延长，这部分患儿会表现正常。因此正常 的NBT结果不能除外CGD。NBT方法用于X ⁺ - CGD携带者筛查较困难，因为在显微镜下区分两 群细胞很困难，甚至正常人10%的细胞NBT阴性。

呼吸爆发反应理想的评价方法应该做到需血 量少、技术简单、能行定量分析，能区分病态和 正常细胞，DHR123流式细胞分析方法均可满足上 述条件 ^[2] 。DHR123可自由出入细胞，定位于线粒 体，经过氧化氢和过氧阴离子氧化后形成罗丹明 123(rhodamine 123,R123)，经蓝光(488 nm) 激发后产生绿色荧光(500~540 nm)。刺激指数 是指经PMA刺激后的平均荧光强度除以PBS刺激 后的平均荧光强度。美国NIH DHR数据库显示正 常人刺激指数(SI)为127.9(85.2~264.6)，X-CGD 患者为1.3(0.9~2.2)，p47phox CGD(常染色体 隐性CGD最常见类型)患者为13.2(3.5~52.1)， 但需注意其中17%X-CGD患儿SI大于4.5，6.4% p47phox CGD患儿SI小于4.5，二者有重叠 ^[8] 。可 见需结合蛋白表达分析和基因突变分析来明确诊 断。

正常人中性粒细胞经PBS及PMA刺激后阳 性细胞百分数是质控标准，PBS刺激后阳性细胞 百分数应<3%，PMA刺激后阳性细胞百分数应接 近100%，由于实验室条件不同，会有一定出入， 但不应偏移太大。由于X-CGD患者吞噬细胞不产 生过氧化物，PMA刺激后峰图和PBS刺激后峰图 相近，完全无移位，换算出的SI接近1。由于常 染色体隐性CGD产生一定量的过氧化物，PMA刺 激后细胞基本都移位至阳性区，只不过细胞荧光 强度较分散，平均荧光强度低，换算出的SI大于 1 ^[9] 。因此在CGD的诊断中平均荧光强度及SI是最 重要的指标。由于本课题组开展此实验较晚，观 察目前的结果，与文献报道比较，正常人经PMA刺激后中性粒细胞移位程度不够大，算出的SI值 小，因此需要更加优化实验条件。可能由于此， 目前常染色体隐性CGD患儿与X-CGD患儿不能通 过DHR来鉴别。

如果平均荧光强度正常，但阳性细胞百分数 未达到90%，甚至更低，说明凋亡细胞过多。一 方面需改进操作手法，由于中性粒细胞在体外非 常脆弱，对外力极其敏感，操作过程一定要轻柔。 另一方面可用DNA染液区分活细胞和死细胞，然 后针对活细胞再进行分析。取血时负压过高，部 分抗凝，运输时间过长或室温孵育，很多情况下 可出现功能不健全的细胞群，甚至功能健全的细 胞数量很少。基于以上因素用于携带者筛查，需 要仔细控制实验分析。如果可能的携带者出现双 峰，一定要控制不同门的位置。携带者的两群细 胞刺激后一直移位到固定位置。如果DHR方法损 伤细胞与携带者有重叠，可做蛋白表达，由损伤 引起者DHR与蛋白表达的差别可达6%。如果无 重叠或无损伤的细胞，二者的差别小于1%。体外 强力的损伤也可引起蛋白表达的人工双峰，此种 情况下，DHR方法提示蛋白表达阴性细胞的损伤， 功能完整细胞一致性正常，故可除外携带者。用 流式方法检测功能健全细胞是很大的优势，如果 有正常细胞群，基本可除外CGD，除非X-CGD携 带者由于极端莱昂化可出现CGD症状。当然，如 果X-CGD患者母亲向正常细胞偏移明显，DHR分 析可不表现双峰 ^[10] 。

由于DHR分布不成对称性，正常范围不能用 标准差，而是用百分位数来表示。DHR不受儿童 年龄、性别或症状影响(严重败血症可使中性粒细 胞代谢耗竭)。儿童和成人正常标准无区别，尽管 儿童的平均值略高，可能与实验操作有关，而不是 生理或医学因素，因此不影响日常CGD诊断 ^[10] 。 髓过氧化物酶(MPO)缺陷可出现假阳性，一方面 两种疾病的临床表现不同，另一方面可用其他方法 来鉴别，如MPO缺陷者嗜酸性粒细胞的DHR功能 正常；体外加入重组人MPO，DHR荧光信号明显 增强；用光泽精标记会有正常的强荧光信号产生 ^[11] 。

DHR123流式细胞分析是X-CGD诊断及携带 者筛查既敏感又特异的方法。