川崎病（Kawasaki disease, KD）是一种以全身 血管炎为主要病变的急性发热出疹性疾病，是一 种由免疫介导引起的急性血管炎综合征^[1]；该病主 要累及冠状动脉，导致冠状动脉扩张（CAD）、 动脉瘤（CAA）甚至心肌梗死，目前 KD 已经成为 我国儿童后天性心脏病最主要的病因^[2]。KD 发病 具有明显的种族特异性，在世界不同地区，发病 率存在差异，并可能存在遗传易感性^[2]。全基因组 关联分析研究表明，CD40 基因可能与 KD 的易感 性相关^[3]，Kuo 等 ^[4] 研究发现单核苷酸多态性（single nucleotide polymorphism, SNP） 位 点 rs4810485 和 rs1535045 为 CD40 基因标签 SNP（tagSNP）。由 于地域及人群的差异，本研究以我国中部地区 KD 患儿为研究对象，进一步探讨 CD40 基因多态性与KD 的易感性，以及患儿存在冠状动脉损伤的相关 性。 1　资料与方法 1.1　研究对象

选取2007年6月至2013年6月在我院儿科 住院的典型 KD 患儿 184 例作为实验组，其中冠状 动脉损伤 63 例；并选取同时期体检正常的 206 名 儿童作为对照组。实验组年龄 4 个月至 6 岁 7 个月， 平均年龄 3.1±2.6 岁；其中男 131 例，女 53 例； 63 例冠状动脉损伤的患儿中 CAD 58 例，CAA 5 例； 5 例 CAA 患儿均为中、小 CAA，未见巨大 CAA。 对照组平均年龄 3.4±2.8 岁，男 138 例，女 68 例。 本研究得到医院医学伦理委员会批准及患儿家属 知情同意。

入选标准符合第 7 次世界小儿 KD 研讨会修 订的诊断标准^[5] ：（1）发热 5 d 以上，抗生素治 疗无效；（2）眼球结膜充血；（3）皮疹，多表 现为斑丘疹，无水泡及结痂；（4）口唇干裂，杨 梅舌；（5）颈部淋巴结肿大；（6）手足红斑， 硬性水肿，恢复期脱皮。以上 6 条中满足 5 条就 可以诊断 KD，仅符合 4 条加上超声心动图发现 CAD 也可诊断。

冠状动脉损伤诊断参照日本卫生厅 1984 年颁 布的冠状动脉病变诊断标准^[6]：CAD 指冠状动脉 5 岁以内 >3 mm，5 岁以上 >4 mm，或扩大的冠状 动脉直径大于其近或远端血管直径的 1.5 倍；CAA 指左冠状动脉（LCA）或右冠状动脉（RCA）主干 内径和主动脉根部内径之比 >0.3。冠状动脉内径 4 mm~7 mm，冠状动脉相应部位出现球形、囊性 或梭形扩张，或呈串珠样改变，提示 CAA；若冠 状动脉明显扩张，内径 >8 mm，则为巨大 CAA。 1.2　研究方法

取 KD 患儿及对照组儿童静脉血 2 mL，利用 酚氯仿抽提的方法提取基因组 DNA，并测定浓度。 以 DNA 为模板分别扩增含有两个 SNP 位点的 DNA 片段。设计的引物分别为 rs4810485 位点：F1： 5'-GGCTCAGAGCCAACCAAGCATATC-3'，R1： 5'-ATTCCTGCCCAGGCTTCAGTC-3'；rs1535045 位 点：F2：5'-GGAATGACCCATGGTATCAAGG-3'， R2：5'-CCCCTTTACCTCTTTCCAGCTG-3'。PCR 总反应体系为25 μL，含有10 倍PCR 反应缓冲 液 2.5 μL，10 mM dNTP 混合液 1 μL，10 μM 引物 各 1 μL，TAKARA Taq 酶 1 U； 反 应 条 件：94 ℃ 3 min；94℃ 30 s，54℃ 30 s，72℃ 30 s，共33 个循环。 取 5 μL 扩增的产物经电泳检测合格以后分别利用 内切酶 BspEI 和 HhaI 进行酶切分析。 1.3　统计学分析

采用 SPSS 19.0 软件对数据进行分析，频率计 数法计算病例组和对照组基因型和等位基因频率， 利用 Hardy-Weinberg 遗传平衡定律检验。各组间 基因型频率分布和等位基因频率分布比较采用χ 2 检验；计数资料采用优势比（OR）及 95%CI表示 相对危险度，P<0.05 为差异有统计学意义。 2　结果 2.1　CD40 基因两个 SNP 位点的基因型 PCR 酶 切电泳结果

各基因型如图 1 所示。

图 1 两个SNP位点的基因型确定 A： 表 示 rs4810485 的 3 种基因型；B：表示 rs1535045 的 3 种基因型。

各组的基因型符合 Hardy-Weinberg 遗传平衡 定律，具有群体代表性。rs4810485 的 3 种基因型 在实验组与对照组之间分布差异无统计学意义， 等位基因频率在两组间差异也无统计学意义（均 P>0.05），说明该 SNP 位点与 KD 易感不相关。 而 rs1535045 的 3 种基因型以及等位基因频率与 对照组相比差异具有统计学意义（均P<0.05）， 说明 T 等位基因为风险因子，与 KD 易感性相关 （OR=1.592，95%CI: 1.182~2.144，P=0.004）。见 表 1。

表 1(Table 1)

表 1 两组两个 SNP 位点基因型分布情况[例(%)]

表 1 两组两个 SNP 位点基因型分布情况[例(%)]

存在冠状动脉损伤的患儿与未损伤的患儿相 比，CD40 基因两个 SNP 位点的多态性均不与冠状 动脉损伤存在相关性（均P>0.05），见表 2。

表 2(Table 2)

表 2 CD40 基因多态性与冠状动脉损伤的相关性分析[例(%)]

表 2 CD40 基因多态性与冠状动脉损伤的相关性分析[例(%)]

KD 在世界各国均有发生，但以亚裔发病率最 高，流行病学调查显示我国 KD 患儿有增加的趋势， 发病率低于日本而高于西方国家^[7,8]。越来越多的 研究表明，一些基因的多态性与 KD 的易感性相关， 如血管紧张素转化酶基因（ACE）、免疫球蛋白超 家族的 FCGR2A、血管内皮生长因子基因（VEGF） 以及 NRAMP1 基因等与 KD 的易感相关^[9,10,11]。

CD40 是 TNF 受体超家族成员 5，分布在质膜， 参与蛋白复合体组装、炎症应答、免疫应答信号 转导等过程，研究表明 CD40-CD40L 信号通路参 与炎症反应的病理过程^[12]；此外 CD40 的表达量 增加会导致细胞内的致炎细胞因子的含量增加^[3]。 CD40 与 CD40L 的相互作用可促进 CD4 + T 细胞的 生长，因此该通路在免疫性疾病中亦有重要作用。 且有研究表明CD40L 基因与KD 的易感性相关^[13]。 因此 CD40 基因的突变或者表达量的改变可能影响 该通路的各种应答过程，从而导致疾病发生发展。

Lee 等 ^[3] 利用全基因组关联分析研究表明 CD40 基因与 KD 存在相关性，但研究的 SNP 位点 与本文不同；Kuo 等^[4] 在台湾人群中研究了 CD40 与 KD 的相关性，与本文结论有不同，本研究中 SNP 位点 rs1535045 与 KD 的易感性相关，TT 为风 险基因型，且该基因型的患儿比台湾儿童更容易 患 KD，可能的原因是地域及种族差异所导致。

本研究中的 SNP 位点 rs4810485 位于 CD40 基 因内含子上面，与 KD 的易感性不相关，可能原 因是 SNP 不影响蛋白的功能和表达量。SNP 位点 rs1535045 与 KD 的易感性相关，推测可能的原因 是影响 CD40 的表达量，进而影响 CD40-CD40L 等 炎症信号反应通路，这一推测需要进一步的实验 来证明。

KD 主要危机生命的并发症为冠状动脉损伤， 可导致血栓形成、CAD、CAA 破裂甚至猝死^[14]， 因此应早期观察 KD 患儿是否为冠状动脉损伤的易 感人群。本研究未发现 CD40 基因两个 SNP 位点 多态性与冠状动脉损伤相关；但本研究中的动脉 损伤的 KD 患儿数量较少，有待今后进一步统计分 析。

综上所述，中国大陆中部地区汉族人群中 CD40 基因 SNP 位点 rs4810485 与 KD 的易感无相 关性。而 rs1535045 的 TT 基因型与川崎病的易感 性相关，T 等位基因为风险因子，由于本研究纳入 的患儿仅限于我国中部地区，考虑到人群及地区 差异，该位点的多态性与 KD 的相关性需要大样本、 多中心进一步来确定；此外，该基因的多态性是 否与冠状动脉损伤相关也需要大量标本来证实。