支气管肺发育不良（bronchopulmonary dysplasia,BPD）是引起持续性呼吸窘迫的慢性肺 部疾病，近年来成为新生儿重症监护病房最为棘 手的问题之一。研究表明不同高浓度氧吸入导致 的BPD 的病理变化并不相同，大于80% 高氧吸入 所引起的肺组织病变以渗出、大量炎症细胞浸润、 胶原生成、严重纤维化为主。当吸入氧浓度在 60% 左右时肺组织的病变却是以肺泡简单化、间 隔变厚、发育迟滞为主要表现，炎症渗出和纤维 化较为轻微^[1]。BPD 患儿肺组织中出现成纤维细 胞增生、细胞外基质（extracellular matrix,ECM） 沉积、肺组织纤维化^[2]。肺纤维化是由多种原因引 起的，研究表明生长转化因子β（TGF-β）可影 响肺发育，同时也在不成熟肺高氧性肺损伤及纤 维化发生发展过程中扮演十分重要的角色，其中 TGF-β1 在体细胞系中所占的比例最高，活性最强， 致纤维化作用最突出^[3]。纤溶酶原激活物抑制剂-1 （PAI-1）是纤维蛋白溶解系统的主要抑制剂， 其主要作用是抑制尿激酶型纤溶酶原激活剂 （urokinase type plasminogen activator,u-PA） 和组 织型纤溶酶原激活剂（tissue-type plasminogen activator,t-PA），纤溶酶原通过 t-PA 和 u-PA 转 化为纤溶酶，降解ECM 或纤维蛋白。近年来动物 实验研究表明，转基因大鼠肺组织内PAI-1 的密 度与肺纤维化的程度呈正相关，气管内滴入重组 u-PA 可以降低肺纤维化发生和病死率^[4]。故推测 TGF-β1、PAI-1 可能参与了 BPD 中肺纤维化的病 理过程。本研究通过对早产儿血液中TGF-β1、 PAI-1 的蛋白表达进行检测，探讨两种因子在 BPD 发病中的变化，从而在其复杂的发病环节中找寻 新靶点，为今后临床治疗提供依据。 1 资料与方法 1.1 研究对象

2010 年1 月至2012 年12 月我院收治胎龄 ≤ 32 周、出生体重≤ 1 500 g 并存活28 d 以上的 早产儿96 例，其中男71 例，女25 例，胎龄25~32 周， 出生体重750 ~1 500 g，其中诊断为BPD 21 例（BPD 组），75 例非BPD 组为对照组。本研究经过医院 伦理委员会批准及家长知情同意。 1.2 BPD 诊断标准

2001 年美国国家儿童保健及人类发展研究院 （NICHD）根据末次月经后孕龄（PMA）定义了 BPD 的诊断标准：早产、低出生体重儿，有或无 机械通气治疗史，吸氧时间≥ 28 d 或到纠正胎龄 36 周仍需要氧疗，伴有持续性或进行性呼吸功能 不全及肺部典型影像学表现: 肺部CT 两肺野呈磨 玻璃状改变、多灶充气过度，如小囊状影（薄壁） 或网格状影（壁厚），纹理增粗、紊乱，条状密 度增高影和胸膜增厚等。病变多发生在两下肺， 常呈对称性。 1.3 标本采集

所有入选患儿分别于生后7 d、14 d、21 d 取 静脉血1 mL，注入促凝管，室温静置30 min 后 1 200 rpm 离心15 min，取上清转移至消毒后1.5 mL EP 管，标记后-20℃冰箱保存备用，ELISA 方法 检测TGF-β1 及 PAI-1 蛋白表达水平。 1.4 临床治疗

临床上尽早根据生后气促、发绀、呻吟及肺 部影像学等表现选择应用肺表面活性物质，必要 时应用呼吸机或选择性应用鼻塞持续气道正压通 气（nCPAP），有感染指征者控制感染，适当限制 液体量，反复呼吸暂停者给予氨茶碱。 1.5 统计学分析

采用SPSS l6.0 统计软件包处理，计量资料用 均数± 标准差（±s）表示，两独立样本组间比 较采用成组t 检验；不同时间点的组间比较采用重 复测量多因素方差分析。P<0.05 为差异有统计学 意义。 2 结果 2.1 两组间TGF-β1 蛋白表达的比较

BPD 组TGF-β1 于生后7 d、14 d、21 d 表 达逐渐增高，且明显高于同时间点非BPD 组，差 异有统计学意义（P<0.01）；各时间点非BPD 组 TGF-β1 蛋白表达差异无统计学意义（P>0.05）。 见表 1 和图 1。

图 1 两组TGF-β1 蛋白的表达比较 注：a 示与同 组7 d 比较，P<0.01；b 示与同组14 d 比较，P<0.01；c 示与同时 间非BPD 组比较，P<0.01。

BPD 组PAI-1 蛋白表达于生后7 d、14 d、 21 d 逐渐增高，且明显高于同时间点非BPD 组，差异有统计学意义（P<0.01）； 非BPD 组 PAI-1 蛋白表达在各个时间点差异无统计学意义 （P>0.05）。见表 1 和图 2。

表 1(Table 1)

表 1 两组TGF-β1 和PAI-1 蛋白的表达比较　 （±s） 注：a 示与同组7 d 比较，P<0.01；b 示与同组14 d 比较，P<0.01。

表 1 两组TGF-β1 和PAI-1 蛋白的表达比较

图 2 两组PAI-1 蛋白的表达比较 注：a 示与同组 7 d 比较，P<0.01；b 示与同组14 d 比较，P<0.01；c 示与同时间 非BPD 组比较，P<0.01。

新生儿处于特定的肺发育时期，对于各种刺 激具有独特的反应。早产儿出生时肺刚脱离小管期 进入囊泡期，由于肺发育不成熟，早产儿出生后比 足月儿更多暴露于机械通气、高浓度氧、炎症损伤 等不利环境之中。且早产儿本身对氧化应激易感， 抗氧化酶活性及维生素C、E 等自由基清除剂水平 均低^[5]。因此新生儿肺损伤和肺纤维化中的机制可 能与成人不尽相同。氧中毒、气压伤或容量伤以及 感染或炎症等各种不利因素对发育不成熟的肺导 致的急性肺损伤，以及损伤后异常修复损伤是引起 “经典型”BPD 的主要原因^[6]。胎龄<28 周的早产 儿宫内感染和（或）炎症发生率高达90%^[7]，体重 ≤ 1 250 g，呼吸机使用≥ 10 d，痰培养阳性3 次以 上是发生BPD 的独立危险因素^[8]。

TGF-β1 不仅可以促进细胞外基质沉积，同 时影响其他纤维化细胞因子，导致纤维化发生。刘 冬云等^[9] 在BPD 患儿肺灌洗液中检测到有IL-8、 SPA 及TGF-β1 的过高表达，孙永强等^[10] 通过免 疫组织化学及免疫荧光技术发现死亡的BPD 患儿 肺组织内TGF-β1 表达明显增高，提示BPD 的发 生与炎症、TGF-β1 的高表达有着密切的关系。 本研究结果也显示在BPD 患儿血液中TGF-β1 表 达明显高于非BPD 组，与文献结果一致^[7,8]。唐 仕芳等^[11] 在新生大鼠高氧暴露同时给予外源性抗 TGF-β1 抗体干预，发现高氧引起的急性肺损伤明 显减轻，有效阻断了肺纤维化的发生、发展，提 示TGF-β1 蛋白的过度表达在BPD 患儿肺间质纤 维化中发挥着重要作用。

PAI-1 是内皮细胞型PAI，是PA 快速、专 一有效的生理抑制因子。u-PA 和PAI-1 作为纤溶 家族的主要成员，二者之间的比例和平衡决定着 ECM 转换的结局。正常肺泡腔内由于存在着u-PA 而保持着“净纤维蛋白溶解活性”，如果u-PA/ PAI-1 失衡，肺泡腔内渗出物不能清除，成纤维细 胞和其他细胞侵入、增殖并产生新的基质蛋白引 起瘢痕形成^[12]。在脂多糖诱导的大鼠急性肺损伤 的动物模型的研究显示，高氧暴露24 h、48 h PAl- 1 mRNA 有上升的趋势，与正常空气组对比持续时 间延长^[13]。本研究对象为≤ 32 周，体重≤ 1 500 g 的早产儿，肺组织发育不成熟，存在应用呼吸机、 肺部感染等所致的急性肺损伤的高危因素，BPD 组在7~21 d 的病程中PAl-1 的表达呈上升趋势， 提示PAI-1 参与了BPD 的发病过程。

动物试验发现新生大鼠高氧暴露早期u-PA 的 表达增多，与早期肺炎性细胞浸润等病理改变相 平行，随着高氧暴露时间延长，肺血管发育障碍 和内皮细胞受损，PAI-1 表达增强，肺组织u-PA/ PAI-1 表达的动态变化趋势与病理改变相平行，提 示u-PA/PAI-1 失衡参与了高氧致慢性肺疾病的发 生发展^[12]。BPD 组患儿血液中生后7 d TGF-β1、 PAI-1 表达已增高，提示早产儿出生后不久已经有 了肺损伤的倾向。

研究显示肌成纤维细胞能分泌无活性 TGF-β1 和PAI-1，而后者与TGF-β 结合蛋白在 纤溶酶的作用下从基质中释放的过程有关^[14]。 BPD 组在TGF-β1 增高的同时，PAI-1 的表达也 明显高于非BPD 组。因此，推测两种因子在BPD 的发病过程中可能起到了协同作用。目前已有文 献报道通过以慢病毒介导的小分子干扰RNA 技 术（siRNA）沉默TGF-β1 基因，可以达到对高 体积分数氧致新生小鼠肺损伤的保护作用^[15]。关 于抑制PAI-1 基因表达的研究较少，有人认为干 扰素、一氧化氮、尿钠排泄因子和降脂药有抑制 PAl-1 表达的作用^[16]。如果从不同的环节阻断或抑 制TGF-β1 及PAI-1 的表达，有可能阻断BPD 的 发病过程。

对于活体肺组织内TGF-β1、PAI-1 蛋白或 mRNA 表达方面的组织病理学研究仍有很大的局 限性。由于本研究仅从血液中检测到TGF-β1、 PAI-1 的高表达，有待于多中心、大样本及组织病 理学的研究论证，如能从不同的环节干预肺组织 EMC 的沉积，对BPD 的发病将起到明显的阻碍作 用。