川崎病（Kawasaki disease,KD）又称为皮肤黏膜淋巴结综合征，是一种病因不明，以急性发热、皮肤黏膜病损和淋巴结肿大等为临床表现的全身性血管炎综合征，好发于5 岁以下的幼儿^[1]。该病是一种病因复杂的多因素疾病，家族聚集现象显示遗传因素在该疾病的发生过程中起着重要作用^[2]。T 细胞淋巴瘤侵袭和转移诱导蛋白1（T-lymphoma invasion and metastasis,TIAM1）基因是普遍存在的二磷酸鸟嘌呤核苷酸（GDP）和三磷酸鸟嘌呤核苷酸（GTP）转换因子^[3]，全基因组关联分析（GWAS）发现该基因与KD 以及冠状动脉损伤的易感性相关^[4]，国内汉族人群未见类似的报道。本研究以我国中部湖北地区汉族KD 患儿为研究对象，探讨TIAM1 基因的两个位点rs2833188与rs2833195 的多态性与KD 易感性及其临床特点的相关性。

选取2012 年3 月至2014 年9 月在我院儿科住院的KD 患儿188 例为KD 组，另选取同期行健康体检的儿童197 例作为对照组，两组儿童均来自湖北咸宁及周边地区。KD 组的纳入标准：（1）符合日本川崎病研究委员会2002 年修订的川崎病诊断标准^[2]，且均是典型KD 患儿；（2）排除猩红热、葡萄球菌烫伤样皮肤综合征、药物过敏及幼年性类风湿性关节炎等疾病。

KD 组纳入的188 例患儿中，男128 例，女60 例，平均年龄2.9±2.4 岁（ 年龄范围4 个月至8 岁2 个月）；对照组197 例儿童中，男125 例，女72 例，平均年龄3.1±2.5 岁（年龄范围8 个月至8 岁）。KD 组和对照组之间年龄和性别比例分布差异无统计学意义（P>0.05）。本研究经医院医学伦理委员会批准并得到入组儿童家属的知情同意。

抽取住院KD 患儿及正常对照儿童静脉血2 mL，利用基因组提取试剂盒（Axygen 公司）提取DNA。以DNA 为模版分别扩增含有单核苷酸多态性（single nucleotide polymorphisms,SNP） 位点的DNA 片段。扩增SNP 位点（rs2833188）的引物为F1：5'-GATAGCTGCAGACATGCATAGCTG-3'，R1：5'-TCTCTCATGGGAGTGGGTTGAC-3'，片段长度为177 bp；扩增SNP 位点（rs2833195）的引物为F2：5'-CACTAGATCAGACAGAAAATAAATTGTT-3'，R2：5'-ATTTGACATGTTTAAAGACTTTAAGACG-3'，片段长度183 bp。PCR 总反应体系为25 μL，含有10 倍PCR 反应缓冲液2.5 μL，10 mMdNTP 混合液1 μL，10 μM 上下游引物各1 μL，TAKARA 公司 Taq 酶1 U，剩余体积用ddH2O 补足；PCR 反应条件：94℃预变性5 min；94℃变性30 s，55℃退火30 s，72℃延伸30 s，共35 个循环。分别取5 μL PCR 扩增的产物利用限制性内切酶（NEB 公司）PstI（酶切位点CTGCAG）以及HpaI（酶切位点GTTAAC）进行酶切，3% 琼脂糖凝胶上行电泳分析。

采用SPSS 19.0 统计软件对数据进行统计学分析。利用Hardy-Weinberg 遗传平衡定律检验KD组及对照组是否具有群体代表性。计量资料用均数± 标准差（x±s）表示，两组间比较采用两独立样本t 检验；基因型频率分布和等位基因频率分布用百分率（%）表示，组间比较采用χ² 检验。P＜0.05 为差异有统计学意义。

利用Hardy-Weinberg 遗传平衡定律检验KD组和对照组，均符合该定律（P>0.05），说明两组均具有群体代表性。两个SNP 位点多态性确定如图 1 所示，其中SNP rs2833188 位点的3 种基因型分别为AA、AG 和GG，KD 组和对照组相比基因型和等位基因分布频率差异无统计学意义（P>0.05）（ 表 1）；rs2833195 位点的3 种基因型分别为CC、GC 和GG，统计结果显示KD 组中该位点3 种基因型频率分布与对照组相比差异有统计意义（P＜0.05），且KD 组中C 等位基因频率高于对照组（P=0.015）（表 1），说明该位点与KD 的易感性相关。

图 1

图 1 TIAM1 基因两个SNP 位点基因型的确定 左图表示SNP 位点rs2833188 的3 种基因型；右图表示SNP 位点rs2833195 的3 种基因型，M 表示Marker。

表 1

表 1 KD 组和对照组两个SNP 位点的基因型及等位基因分布　[n（%）]

表 1 KD 组和对照组两个SNP 位点的基因型及等位基因分布　[n（%）]

KD 组纳入的KD 患儿在初诊时多有结膜充血（165 例，87.8%）、皮疹（122 例，64.9%）、口腔黏膜病变（157 例，83.9%）、淋巴结肿大（142 例，75.5%）、手足水肿（143 例，76.1%）等症状，其中经超声心动图检查，存在冠状动脉损伤的患儿45 例（23.9%）； 此外13 例（6.9%）KD 患儿初次静脉注射丙种球蛋白（IVIG）无反应。统计结果显示，TIAM1 基因SNP 位点（rs2833188）不同基因型KD 患儿结膜充血的发生率比较差异有统计学意义（P＜0.05）（表 2）；而SNP 位点（rs2833195）与KD 患儿皮疹的发生相关，不同基因型患儿皮疹的发生率比较差异有统计学意义（P＜0.05）（表 3）。

表 2

表 2 TIAM1 基因SNP rs2833188 位点多态性与KD 临床特点的相关性　[n（%）]

表 2 TIAM1 基因SNP rs2833188 位点多态性与KD 临床特点的相关性　[n（%）]

表 3 (Table 3)

表 3 TIAM1 基因SNP rs2833195 位点多态性与KD 临床特点的相关性　[n（%）]

表 3 TIAM1 基因SNP rs2833195 位点多态性与KD 临床特点的相关性　[n（%）]

KD 由日本学者川崎富作于1967 年首次报道，是一种急性、自限性的全身血管炎，该病在世界范围内均有发生，但以亚洲地区发病率最高^[5]，流行病学调查显示我国KD 发病率有上升的趋势^[6]。约50% 的患儿可并发心肌炎、心包炎、心力衰竭等心脏损害，约15%~25% 的患者存在冠状动脉损伤，研究发现该疾病已取代风湿热成为小儿后天心脏病的主要病因之一^[2]。

TIAM1 基因位于21 号染色体q22.1 区域，编码含有1 591 个氨基酸的蛋白，该基因是一种原癌基因，其编码的蛋白N 端切除以后可激活其致瘤活性^[7]。研究发现TIAM1 基因在不同组织来源的肿瘤细胞中大量表达，且该基因在TIAM1-Rac信号通路中发挥重要作用，TIAM1 不仅可以激活Rac-GTPase，还参与选择Rac 效应器，参与细胞骨架的活性调节，在细胞的迁移及肿瘤细胞侵袭过程中起重要作用^[8]。

有研究发现TIAM1 蛋白在诱导T 细胞迁移过程中发挥重要作用，缺少TIAM1 蛋白，T 细胞就从旁细胞迁移途径（paracellular transmigration）转变为跨细胞迁移（transcellular migration），即直接通过单个内皮细胞^[9]，推测该基因参与免疫系统疾病。

本研究中的SNP 位点（rs2833188） 位于TIAM1 基因的下游非编码区域，研究结果显示该位点多态性与KD 的易感性不相关，推测该位点可能不影响TIAM1 基因的表达水平；但统计分析发现该位点的多态性与KD 患儿结膜充血相关，该现象需要大样本验证，具体的机理需要进一步的研究分析。本研究发现SNP 位点（rs2833195）与KD 的易感性相关，C 等位基因为风险因子，推测该多态性可能影响TIAM1 基因的表达水平，且该位点与皮疹的易感性相关，具体的机理亦需要在细胞水平进一步研究。

KD 最严重的并发症为冠状动脉损伤，可导致冠状动脉狭窄、动脉瘤破裂等；组织病理学研究发现：在KD 的急性期存在淋巴细胞渗透动脉血管壁的现象^[10]，该现象可能是TIAM1 蛋白表达量变化或者功能的改变导致细胞跨细胞迁移所致，进而导致动脉损伤。但本研究中未见两个SNP 位点多态性与CAL 相关，该结果与台湾学者的结论不同^[4]，可能的原因是纳入的病例数较少或者是由于地区以及人群的差异。

总之，本研究发现TIAM1 基因的SNP 位点（rs2833195）的多态性与KD 的易感性相关，C 等位基因为风险因子，且该位点与皮疹的发生存在相关性，该结果为更好的认识KD 的发病机理提供了一定的帮助。但该研究仍存在一定的缺陷：标本量较少，并且是单中心研究；今后应加强地区间合作，收集更多的标本，进一步探讨该基因与KD 以及临床特点的相关性。