白血病是造血系统的一种恶性肿瘤，是最 常见的儿科肿瘤疾病，其中急性淋巴细胞白血病 （ALL）约占儿童白血病的80%^[1]。越来越多的研 究表明，遗传易感性可能与肿瘤的形成有关^[2]。 RAD50 基因、MRE11 基因以及NBN 基因编码的 3 个蛋白组成MRN 复合体，该复合体具有修复双 链DNA，维持基因组稳定的功能^[3]。研究发现该 复合体异常可导致毛细血管扩张性共济失调样病 （AT-LD），以及增加癌症发生的风险^{[4, 5]}，且国 外Maria 研究组发现MRN 复合体3 个基因异常可 能与儿童白血病相关^[6]，国内未见RAD50 基因多 态性与白血病相关性的报道。本研究以我国中部地区儿童ALL 患儿为研究对象，探讨RAD50 基因 SNP 位点rs17166050（c.551+19G>A）多态性与儿 童ALL 的相关性。 1　资料与方法 1.1　研究对象

2012 年6 月至2014 年6 月在我院儿科住院的 ALL 患儿177 例为研究对象，232 名健康儿童作为 对照组。ALL 组的纳入标准：符合中华医学会儿 科学分会血液学组制定的 《儿童急性淋巴细胞白 血病诊疗建议（第三次修订草案）》^[7] 诊断为ALL 的患儿；年龄<14 岁。对照组的入选标准：年龄 <14 岁；体检未发现异常的儿童，排除各系统的疾 病。

ALL 组中，男104 例，女73 例，年龄5±3 岁（范 围：3 个月~11 岁9 个月）。对照组中，男134 例， 女98 例，年龄5±4 岁（范围：6 个月~11 岁）。 两组在性别、年龄方面比较差异无统计学意义。 两组儿童户籍所在地均为湖北武汉或其周边地区。

ALL 组中，标危66 例，中危69 例，高危42 例。 其中融合基因阳性的患儿60 例（33.9%）， 包括TEL/AML1 42 例，E2A/PBX1 6 例，BCR/ABL 8 例，MLL/AF9 2 例，MLL/AF4 1 例，MLL-PTD 1 例。 1.2　RAD50 基因多态性分析

标本采集前得到两组儿童家属的知情同意 以及医院医学伦理委员会的批准。两组儿童各 取静脉血2 mL，利用酚- 氯仿抽提的方法提 取基因组DNA。以基因组为模板扩增含有SNP 位点的DNA 片段。设计的引物分别为： 正向GTTCAATAACTTAATGGACTACAAAGC，反向 CGAGAAATGATCAGTTCTCTTGG。PCR 总反应体 系为25 μL，含有10 倍PCR 反应缓冲液2.5 μL， 10 mMdNTP 混合液1 μL，10 μM 引物各1 μL， TAKARA Taq 酶1 U；反应条件：94℃ 3 min 预变 性，94℃ 30 s 变性，56℃ 30 s 退火，72℃ 30 s 延 伸，共35 个循环。取5 μL 扩增的产物利用内切酶 HindIII 进行酶切电泳分析。 1.3　统计学分析

采用SPSS 16.0 软件进行数据统计与分析。计 数资料采用频数和百分率（%）表示，组间比较采 用χ² 检验。计量资料以均数± 标准差（x±s）表示。 P<0.05 为差异有统计学意义。 2　结果 2.1　RAD50 基因多态性与ALL 的相关性

经检验，各组均符合Hardy-Weinberg 遗传平 衡定律。3 种基因型分布在ALL 组和对照组之间差 异有统计学意义（P=0.038），其中ALL 组G 等位 基因的频率高于对照组，说明G 为易感等位基因 （OR=1.459，95%CI：1.034~2.057，P=0.031）； 且GA 以及GG 基因型的风险分别是AA 基因型的 3.273 与3.384 倍，见表 1。

表 1(Table 1)

表 1 RAD50 基因多态性与ALL 的相关性分析

表 1 RAD50 基因多态性与ALL 的相关性分析

以标危组为参考（OR=1.000），中危组 GG 基因型比例与标危组相比差异无统计学意义 （P=0.708），高危组与标危组相比差异亦无统计 学意义（P=0.209），见表 2。

表 2(Table 2)

表 2 RAD50 基因多态性与ALL 临床危险度的相关性 [n（%）]

表 2 RAD50 基因多态性与ALL 临床危险度的相关性

白血病是儿童中最常见的一种恶性肿瘤，利 用核型分析以及分子生物学的方法发现很多患者 存在染色体异常（染色体拷贝数异常或断裂重组）。 在人体内维持基因组DNA 稳定取决于DNA 损伤 反应（DNA danmage response,DDR）^[5]，DDR 是一 个功能性的网络，包括信号转导、细胞循环调控 以及DNA 修复等过程。DDR 控制着DNA 双链的 断裂及修复，该过程可以阻止体内基因组的改变 以及癌症疾病的发生^[8]；由RAD50、MRE11 以及 NBN 组成的MRN 复合体是DDR 反应的核心组成 部分。有研究表明DDR 有关的基因发生突变会导 致有遗传倾向的癌症以及其他严重疾病的发生^[9]。

RAD50 基因位于5 号染色体5q31 区域，该基 因编码的蛋白与MRE11 以及NBN 基因编码的蛋 白组成MRN 复合体，行使修复双链DNA 的功能， 对维持基因组及其端粒的稳定有重要意义。有研 究表明RAD50 基因SNP 位点（rs17166050）G 等 位基因与克罗恩病的易感性相关^[10]；且有研究发 现该基因突变导致患乳腺癌的风险增加^[11]。

本研究结果显示，ALL 患儿含有GG 基因型 的比例高于对照组，且相对于AA 基因型，GG 基因型患儿患ALL 的风险提高了3.38 倍，推测 该SNP 位点的多态性影响RAD50 行使正常的功 能。Mosor 等^[6] 研究发现，SNP 位点rs17166050 （c.551+19G>A）的A 等位基因可降低患白血病 的风险，本研究结果与之一致。该SNP 位点位于 RAD50 基因4 号内含子上，该位点多态性可能影 响该基因转录的RNA 的剪接过程，但国外研究者 证实该位点不影响RNA 剪接过程，G 和A 等位基 因转录的RNA 长度一致^[5]；但对RAD50 基因的表 达有影响；含有G 等位基因的RAD50 表达量高于 A 等位基因，推测高表达RAD50 可能影响MRN复合体形成，DNA 受损不能及时修复，导致疾病 发生。

根据患者发病的年龄、初诊时的临床特点、 遗传学特点以及早期治疗反应情况，把患儿划 分为标危、中危和高危3 种类型。本研究发现 RAD50 基因中该位点GG 基因型的ALL 患儿高危 的风险更大，相对于标危患儿，GG 基因型高危风 险提高了1.718 倍，但该结论不具有统计学意义， 今后将收集大样本做进一步的验证。

综上所述，RAD50 基因上的SNP 位点 （rs17166050）的多态性可能与我国中部地区儿童 ALL 的易感性相关，其机制尚需进一步研究。