范可尼贫血（Fanconi anemia,FA）是一种常染色体或X 连锁隐性遗传性疾病，主要临床表现为先天性发育异常、进行性骨髓衰竭和早期发生血液肿瘤或其他实体瘤^[1]。FA 治疗的主要方法有口服药物（雄激素+/- 糖皮质激素）、支持治疗（输注血液制品）、异基因造血干细胞移植及基因治疗等。我国FA 的治疗仍以口服药物治疗为主，但临床分型相同的的FA 患者，即使治疗相同，其疗效亦存在差别，原因尚不完全清楚，为此我们初步分析了6 例口服雄激素+ 糖皮质激素治疗的FA患者临床资料及基因分型相关内容，探讨FA 临床进展与基因分型之间的关系。

回顾性分析2013 年9 月至2015 年3 月就诊于我院，经临床表现、血常规、骨髓象、单细胞凝胶电泳实验、丝裂霉素C（mitomycin C,MMC）诱导的染色体断裂实验、二代测序确诊为FA，并且均为口服药物治疗的6 例患者。6 例患者均予口服康力龙（每次2 mg，每日1 次）+ 泼尼松（每次 5 mg，每日1 次），3 个月无效则停用。根据血常规，将6 例患者分为轻、中、重度3 组，均予门诊复诊及电话随访，中位随访时间54 个月（13~84个月），并根据患者治疗后3，6，9，12 个月的血常规进行疗效评价。有效：初诊与随访时均为轻度或随访时由重度转为轻、中度以及中度转为轻度。无效：疾病分组由轻度转为中、重度，或由中度转为重度或者死亡。

FA 的诊断及分组依据2008 年制定的FA 诊断及分组标准^[2] 进行。

患者初诊时取静脉血5 mL（肝素抗凝），利用密度梯度离心法进行单个核细胞分离。调整细胞最终浓度至105~106/mL，取30 μL 细胞悬液进行琼脂糖凝胶电泳，计算彗星细胞率。实验具体步骤及彗星细胞率的计算方法参见文献^[3-4]。彗星细胞率>30% 可诊断FA。

采用IAEA 的标准化方法^[5] 进行染色体培养，24 h 后加入MMC，继续培养48 h，收获细胞，预固定、低渗制片，普通光镜观察，镜下计数100个分裂相，计数染色体畸变细胞，进行畸变率分析。如染色体畸变率>30% 为阳性，可诊断为FA。丝裂霉素C 的浓度选取0、40、80 ng/mL。每份标本分析100 个分裂相。

利用基于第二代测序方法设计的包含249 种先天性骨髓衰竭性疾病的诊断试剂盒（北京迈基诺基因科技有限责任公司），对患者外周血提取的DNA 进行FA 突变基因检测。对于基因检测没有纯合突变或复合杂合突变、不能进行基因分型的FA 患者利用互补实验进行检测（由印第安纳大学医学院赫尔曼儿科研究中心完成）。

6 例患者的染色畸变率在32%~39%，彗星细胞率在39%~69% 之间，可诊断为FA。6 例患者中男性4 例、女性2 例，均有畸形；中位随访时间54 个月（13~84 个月）。6 例FA 患者中，5 例为FANCA 型、1 例为FANCM 型，4 例携带2 种及以上FA 基因突变。初诊时轻度、中度及重度各2 例，初诊为轻度的患者中，治疗12 个月随访时为轻度的患者1 为FANCA 基因的纯合突变，诊断为FANCA 型；治疗12 个月随访时为重度的患者2，除存在FANCA 的纯合突变、杂合突变外，还存在FANCB 的纯合突变、FANCM 的复合杂合突变，对其父母进行验证，显示患者母亲携带有FANCB 基因突变，对患者2 进行互补实验，确诊为FANCA 型。初诊为中度的两位患者中，治疗12个月随访为轻度的患者3 为FANCM 与FANCD1 的复合杂合突变，对其父母进行验证，显示患者的FANCM 两个突变一个来自母亲、一个来自父亲，提示患者为FANCM 型；而治疗12 个月随访时为重度的患者 4 却同时存在FANCA，FANCD1，FANCD2 三种基因突变，经过验证其母亲携带FANCA 基因的突变位点，虽然Chr1688389826-32delGGGCTGT 在Rockefeller 大学FA 突变数据库中未发现，但Chr1688389829-30delCT 在此数据库中报道过3 次，故此患者可诊断为FANCA 型。在初诊为重度的2 例患者中，治疗12 个月随访为轻度的患者5 为FANCA 的复合杂合突变，诊断为FANCA 型；而治疗12 个月随访为重度的患者6 除含有FANCA 突变外，还存在FANCI 的杂合突变，突变位点FANCA Chr16883853-54delGG在Rockefeller 大学FA 突变数据库中亦未发现，但Chr16 88385351-54delGAGG 报道过1 次，Chr1688385351delG reported 报道过3 次，根据相应结果分析，此患者为FANCA 型。见表 1。

表 1

表 1 6 例FA 患者的基因检测结果与临床特征

表 1 6 例FA 患者的基因检测结果与临床特征

范可尼贫血（FA）是一种少见的常染色体或X 连锁隐性遗传性疾病，是最常见的遗传性骨髓衰竭综合征，其发病率为1~5/100 万，基因携带率为1/300^[1]。FA 主要由相关基因突变所致，最终影响DNA 修复过程。根据突变基因种类的不同，目前FA 分为FANCA，FANCB，FANCC，FANCD1，FANCD2，FANCE，FANCF，FANCG，FANCI，FANCJ，FANCL，FANCM，FANCN，FANCO，FANCP，FANCQ 及FANCS 等17 种类型。不同类型的FA 患者其临床预后存在异质性，如FANCO与FANCS 患者到目前为止未见发展为骨髓衰竭性疾病的报道^[6]，故准确的基因分型对于FA 患者的预后判断尤为重要^[7-9]。另外，不同的FA 基因杂合突变可产生不同的病理生理学作用，如FANCD1突变与乳腺癌的发生密切相关，FANCD2 突变与儿童T- 急性淋巴细胞白血病和睾丸精原细胞瘤有一定关系，单泛素化的FANCD2 与BCR-ABL1 激酶诱导的白血病发生相关等^[10-17]。

国外报道的FA 基因突变多是同一个FA 基因的纯合或复合杂合突变，一个患者同时携带2 种或以上FA 突变基因的报道较少^[18]。本研究6 例FA 患者中，5 例患者为FANCA 型，1 例患者为FANCM 型，4 例患者携带2 种及以上FA 基因突变。与国外研究不同，可能与FA 患者的遗传背景不同或FA 基因突变的携带率与国外存在差异，还需扩大样本量建立FA 突变数据库以进一步研究。本研究显示，治疗12 个月时评估为重度的3 例患者，发病年龄较小，均为2 种及以上的基因突变，提示不同的FA 基因突变类型临床转归可能不同，基因突变越复杂，患者疗效可能越差，越有可能进展为重型，此类患者应尽早进行造血干细胞移植。

本文通过临床资料与基因测序相结合，初步探讨了FA 临床转归与基因分型间的关系。但范可尼贫血是一种异质性较强的先天性骨髓衰竭性疾病，目前我国尚无FA 的流行病学及大样本数据分析，更没有FA 相关突变的数据库进行参考，还需进行多中心协作，建立FA 突变数据库，为FA 基因诊断应用于临床治疗的指导提供理论依据。