视网膜母细胞瘤（retinoblastoma, RB）在存活婴幼儿中的发病率约为1/20 000，是婴幼儿最常见的原发性眼内恶性肿瘤，严重地影响婴幼儿的视力及生命^[1]。RB早期诊断困难，就诊时部分患儿已处于中晚期，治疗难度增大，治疗后转移、复发的比例也明显增加。因此，早期诊断及疗效监测对于降低RB的病死率显得尤为重要。肿瘤标记物（tumor marker, TM）对于多种肿瘤的早期诊断、疗效监测及预后评估都非常有价值^[2-4]，但关于视网膜母细胞瘤相关TM的研究及文献报道很少，尚未发现RB特异性的TM。本研究选择常用且检测方法简便的7种血清肿瘤标记物：甲胎蛋白（alpha fetoprotein, AFP）、癌胚抗原（carcino-embryonic antigen, CEA）、神经元特异性烯醇化酶（neuron specific enolase, NSE）、以及糖类抗原125（carrbohydrate antigen125, CA125）、CA153、CA199、CA724，进行RB患儿与对照组的对照研究，以发现这些TM表达与RB之间的关系，拟筛选出RB相关的TM。

选择2014年6月至2016年6月深圳市人民医院儿科确诊并接受化疗，且资料完整的20例RB患者作为研究对象。RB患者根据眼部CT、双眼彩色超声多普勒、眼底照相及眼球摘除后病理检查确诊，年龄3~57个月，中位年龄19个月；男性患儿8例（40%），女12例（60%）；单眼受累14例（70%），双眼受累6例（30%）；化疗前未行手术者11例，化疗前行眼球摘除术者9例（术后1个月内开始化疗）。

RB分为4期^[5]：眼内期、青光眼期、眼外期及转移期。根据IIRC法（international intraocular retinoblastoma classification）^[6]，眼内期RB又分为A~E期。本组眼内期17例，其中A~C期5例、D期7例、E期5例；青光眼期1例，眼外期2例, 无转移期患儿。

对照组选取同期我院健康体检儿童20例，无特殊的既往史或家族史，其中男性7例、女性13例，年龄2~65个月，中位年龄23个月。

采集RB组化疗前及对照组空腹、非抗凝静脉血3 mL，室温下静置30 min，自凝后4 000 r/min

离心10 min，分离血清置于-20℃冰箱保存待检。采用化学发光法（Roche公司Cobase 601全自动化学发光免疫分析仪）及原装配套试剂盒（瑞士罗氏公司提供）测定CA125、CA199、CA153、CA724、CEA、NSE、AFP。操作按照说明书进行。

（1） 根据试剂盒所提供标准，各肿瘤标记物正常参考值范围：CA125 < 35 U/mL，CA199 < 39 U/mL，

CA153 < 25 U/mL，CA724 < 10 U/mL，CEA < 10 ng/mL，

NSE < 15.2 ng/mL，AFP < 9 ng/mL，大于参考值即为阳性。（2）联合检测的阳性判定标准：联合检测组合中任一指标超过正常值即为阳性。

灵敏度=（真阳性数/确诊RB人数）×100%；

特异度=（真阴性数/非RB患者人数）×100%；

约登指数=（灵敏度+特异度）-1。

应用SPSS 20.0统计软件进行数据处理。计量资料以均数±标准差（x±s）表示，两样本均数的比较采用独立样本t检验；计数资料以百分率表示，两样本百分率的比较采用χ²检验。P < 0.05为差异有统计学意义。

RB组的肿瘤标记物NSE、CA153、CA199水平高于对照组（P < 0.05），两组间AFP、CEA、CA125、CA724水平的差异无统计学意义（P > 0.05）。见表 1。

表 1

表 1 两组患儿各种血清标记物的水平比较（x±s）

表 1 两组患儿各种血清标记物的水平比较（x±s）

RB组未行手术者11例，已行手术治疗者9例。两组间NSE、CA153、CA199的表达差异无统计学意义（P > 0.05），见表 2。

表 2

表 2 未手术与已行手术RB患者的肿瘤标记物水平比较（x±s）

表 2 未手术与已行手术RB患者的肿瘤标记物水平比较（x±s）

RB组及对照组的CA125、CA724、CEA阳性率均为0。AFP显著增高的2例RB患儿及3例对照组均为2~7个月婴儿，考虑AFP升高与年龄有关，因此未进行组间AFP阳性率的比较。RB组NSE、CA153、CA199的阳性率高于对照组（P < 0.05），见表 3。RB组2例患儿的CA153与CA199均阳性。

表 3

表 3 病例组与对照组肿瘤标记物的阳性率比较[例（%）]

表 3 病例组与对照组肿瘤标记物的阳性率比较[例（%）]

NSE、CA153、CA199 3个肿瘤标志物中，NSE灵敏度最高，但特异度相对较低；CA153、CA199特异度较高，敏感度相对较低；NSE约登指数最高。见表 4。

表 4

表 4 不同肿瘤标记物诊断RB的灵敏度及特异度

表 4 不同肿瘤标记物诊断RB的灵敏度及特异度

目前，确诊RB主要依靠眼部CT、眼部彩色超声多普勒、眼底照相以及眼球摘除后的病理检查等综合手段。而RB常发生于婴幼儿，不易被早期诊断，就诊时部分患儿已处于中晚期，治疗难度加大。RB多采用化疗结合局部治疗的方法，取得了较好的疗效^[7]。但部分患者化疗后病情仍进展，需行眼球摘除手术；部分已行眼球摘除的患者化疗后也可能出现眼外转移。因此，RB患者的早期诊断及个体化治疗对于预后改善非常重要，寻找对于早期诊断、疗效评估及预后判断有指导意义的血清学指标意义重大。

TM是在肿瘤细胞发展和增殖过程中，由肿瘤细胞合成、分泌或是机体对肿瘤细胞发生反应而产生的一类物质^[8]。本研究选择7个常用血清TM进行研究，以期寻求对RB诊疗有意义的TM。

NSE是神经内分泌细胞分泌的烯醇化酶同工酶，是神经母细胞瘤、小细胞肺癌和甲状腺髓质癌等神经内分泌肿瘤的特异性标志^[9-10]。近年来国内外有文献报道NSE用于RB的诊断^[11]。国内有研究显示，血清和房水NSE是有价值的RB诊断标记物^[12]。胡慧敏等^[13]研究表明，血清NSE检测对于RB远处转移有诊断价值。本研究RB组NSE水平及阳性率均高于对照组，而且RB组NSE阳性率达100%，与文献相符。提示NSE可能对RB诊断具有参考价值；但本研究NSE在对照组的阳性率也达40%，说明其特异性不够高，最好能联合其他TM一起用于RB诊断。

CA153最早发现于乳腺癌上皮细胞，常在乳腺癌患者过度表达，是监测乳腺癌的重要标志物，在其他一些恶性肿瘤如肺癌、胃癌、卵巢癌中也有增高^[14]。CAl99是一种粘蛋白型糖蛋白，在血清中含量甚微，常分布于正常胎儿的胰腺、胆囊、肝脏、肠以及正常成人的胰腺、胆管上皮等部位，是对胰腺癌敏感性最高的TM，在一些消化道炎症也有不同程度升高^[15]。本研究RB组的CA153、CA199的水平及阳性率均高于对照组。原因有待进一步研究。本研究CA153特异度为100%、CA199为90%，但二者灵敏度均较低，CA153为30%、CA199为40%，因此血清CA153、CA199可能是与RB相关的肿瘤标志物，联合其他更为敏感的指标如NSE可提高诊断的有效性。

AFP是诊断肝脏肿瘤最具特异性的TM，在一些消化道肿瘤及胚胎瘤中，也有程度不等的增高^[16]。

本研究AFP显著增高的2例RB患儿及3例对照组儿童均为2~7个月婴儿，AFP的增高与年龄有关；而且RB组与对照组的AFP差异无统计学意义。因此，AFP对RB诊断可能参考意义不大。C EA是一种糖蛋白，在成人血清中含量极少，主要作为结肠癌的一个预测指标^[17]。CEA属于非器官特异性肿瘤相关抗原，在胃癌、胰腺癌、乳腺癌、肺癌等肿瘤中均可能过度表达^[18-19]。CAl25于1983年由Bast等从上皮性卵巢癌抗原中首次检出，是一种高分子糖蛋白复合物^[20]。CAl25升高主要见于妇科肿瘤患者，现已被应用于卵巢肿瘤的诊断、预后评估及随访^[21]。Cedre' s等^[22]报道CAl25与肺癌也有一定的关系。在乳腺癌、肠癌、宫颈癌、子宫内膜癌以及一些炎症性疾病，CAl25也可能增高^[23]。CA724存在于多种肿瘤，如胃癌、胰腺癌、乳腺癌、肺癌、卵巢癌等，但对于胃癌的诊断具有较高敏感性和特异性^[2]。本研究中CEA、CAl25、CA724在RB组均阴性，与对照组水平的差异无统计学意义，对RB的诊断可能没有指导意义。

综上，NSE、CA153、CA199在RB组的表达及阳性率均较高，三者结合可能可作为视网膜母细胞瘤诊断及疗效监测的标志物。但本研究例数有限，通过多中心研究扩大样本量，了解这些TM在不同分期以及手术、化疗等治疗过程中的动态变化，有助于更准确地分析其与RB病情及预后的关系。