过敏性紫癜(Henoch-Schönlein, HSP)是一种由免疫复合物介导的小血管炎，儿童较常见，常表现为皮肤对称性紫癜，部分伴有腹痛、消化道出血、关节疼痛、肾脏损害等，其中紫癜性肾炎(Henoch-Schönlein purpura nephritis, HSPN)是最常见的一种继发性肾脏病，影响过敏性紫癜的发展及预后。HSP的血管损伤机制尚不完全清楚，近年研究发现，内皮细胞损伤在HSP的发病机制中起重要作用^[1]。内皮细胞微粒(endothelial microparticles, EMPs)是一种直径为0.1~1 µm的小囊泡，由内皮细胞在激活、凋亡或代谢时释放，与动脉硬化、肿瘤及糖尿病等多种疾病的发生发展密切相关^[2]。EMPs作为内皮细胞损伤的标志物，目前已成为研究热点，但其与过敏性紫癜的关系却鲜有报道。本研究将健康儿童与HSP患儿的EMPs水平进行比较，探讨EMPs与HSP内皮细胞损伤的相关性，进一步研究HSP内皮细胞损伤的机制，为HSP及HSPN的诊断提供理论依据。

1 资料与方法 1.1 研究对象

选取2016年1月至2017年12月在河南省儿童医院初诊并治疗的100例HSP患儿为研究对象，其中尿检异常、经肾穿刺活检符合HSPN诊断的40例，非HSPN的60例。过敏性紫癜诊断参照2006年欧洲风湿病联盟(EULAR)和欧洲儿科风湿病学会(PRES)新标准^[3]。HSPN诊断参照2009年中华医学会儿科学分会肾脏病学组制定的紫癜性肾炎诊断标准^[4]。并以同年龄段我院门诊体检的健康儿童30例为对照组。100例HSP患儿的平均年龄4.9±2.1岁。对照组平均年龄4.6±1.8岁。HSPN、非HSPN及对照组三组间的年龄差异均无统计学意义(F=0.834，P > 0.05)。

研究获得医院医学伦理委员会批准以及患儿家长知情同意。

1.2 EMPs测定

所有研究对象在治疗前取空腹静脉血5 mL(枸櫞酸钠抗凝)，160 rpm离心10 min，取上清180 rpm离心10 min，取上清得到贫血小板血浆(platelets-free plasma, PFP)，分装后-80℃冰箱保存。

EMPs测定参照文献^[5]：37℃水浴箱中溶解PFP样本，4℃下1 500 rpm离心30 min，弃去上清，取50 μL沉淀，加入特异性荧光标记抗体(抗CD31-藻红蛋白、抗CD42b-FITC抗体，购自美国BD公司)10 μL，室温避光孵育30 min，加入1 mL PBS待流式细胞仪检测。标本上机前用直径1.0 μm的标准微球进行前向角设门，使门内的微颗粒直径 < 1.0 μm，然后将标本混匀上机检测，收集门内微颗粒进一步行FITC和PE荧光强度分析。EMPs定义为直径 < 1.0 μm且CD31⁺/CD42b^-。每个样本收集10 000个微粒，获得CD31⁺/CD42b^-EMPs的含量。

1.3 Th17细胞含量及血清IL-17水平测定

所有研究对象在治疗前采集空腹静脉血2 mL(肝素钠抗凝)，采用流式细胞术三色荧光标记法检测Th17细胞(CD3⁺CD8^-IL-17⁺细胞)含量，CD3-FITC、CD8-PerCP、IL-17-PE抗体来自美国BD Bioscience公司。采用ELISA方法检测血清IL-17水平，试剂盒购自德国QIAGen公司。

1.4 统计学分析

应用SPSS 22.0进行数据处理。正态分布的计量资料采用均数±标准差(x±s)表示，多组间比较采用单因素方差分析，多组间两两比较采用SNK-q检验。两个变量的相关性分析采用Perason直线相关性分析。P < 0.05为差异有统计学意义。

2 结果 2.1 3组间Th17、IL-17及EMPs水平比较

Th17、IL-17在HSPN及非HSPN组均高于对照组，以HSPN组最高，差异有统计学意义(P < 0.05)；HSPN及非HSPN患儿的EMPs水平较健康对照组升高，以HSPN组最高，差异有统计学意义(P < 0.05)。见表 1。

2.2 HSPN患儿的Th17、IL-17水平与EMPs的相关性分析

HSPN患儿的Th17、IL-17水平与EMPs水平呈正相关(r=0.830、0.644，P < 0.05)，见图 1、2。

3 讨论

中性粒细胞浸润、内皮细胞损伤是过敏性紫癜的重要病理生理基础^[6]。内皮细胞损伤可释放大量促炎因子、内皮细胞微粒(EMPs)及黏附分子等，进一步诱导内皮损伤、促进炎症反应。

内皮细胞微粒(EMPs)是由活化或凋亡的血管内皮细胞释放的小囊泡，EMPs促进IL-6及IL-17释放，而炎性因子又诱导EMPs产生^[7]。EMPs损伤血管内皮细胞的机制包括：(1)一氧化氮(nitric oxide, NO)是内皮细胞性血管舒张因子，而EMPs可抑制内皮细胞释放NO，降低由乙酰胆碱介导的血管舒张功能，导致内皮细胞功能损伤^[8]。(2)EMPs促进内皮细胞损伤处的血小板聚集形成微血栓，促进血管内皮细胞损伤；(3)EMPs影响T淋巴细胞活化及其功能。有研究^[9]发现，高浓度EMPs干预组的CD69表达水平较高，而CD69是T细胞活化早期表达的蛋白。EMPs还可诱导TH1型细胞因子分泌如IFN-γ和IL-2，而IFN-γ和IL-2的表达增加又可促进Th细胞的增殖及分化^[10]。Th细胞的过度活化进一步激活B淋巴细胞，导致免疫功能紊乱。

有研究^[11]表明，EMPs在白塞病、脑血管疾病、急性冠脉损伤综合征、慢性肾病等均有明显升高。这些疾病均有不同程度的血管内皮细胞损伤，而血管内皮细胞损伤也是过敏性紫癜的重要病理生理基础。EMPs在过敏性紫癜患儿中的表达及其意义尚不清楚。本研究发现，EMPs在HSP的肾炎和非肾炎患儿中均明显升高，提示EMPs在过敏性紫癜的发病机制中可能起一定作用。而且HSP患儿的IL-17较对照组升高，提示EMPs可以促进IL-6、IL-17等炎性因子释放，与文献研究一致。结果还表明，过敏性紫癜有肾损伤患儿的EMPs、IL-17更高，提示升高的EMPs可能是过敏性紫癜患儿肾脏受累的原因之一。

免疫机制紊乱在HSP发生发展中占重要地位。本研究HSPN组的EMPs与Th17及IL-17表达均呈正相关，提示EMPs可能诱导Th17活化，刺激机体产生IL-17。与文献报道一致。另有研究^[12]表明，Th17细胞及其分泌的IL-17在HSPN的表达高于无肾脏受累的HSP患儿。本研究的Th17、IL-17水平也是以HSPN组最高。

综上所述，EMPs在过敏性紫癜的发病机制中起一定作用，升高的EMPs可能是过敏性紫癜患儿肾脏受累的原因之一。